Efeitos do PDGF-BB na taxa de proliferação e na adesão de células derivadas da granulação óssea a fragmentos radiculares / Effects of PDGF-BB on the rate of proliferation and on the adhesion of human cells derived from bone granulation tissue to root fragments

O objetivo deste estudo foi investigar o papel do fator de crescimento derivado de plaquetas-BB (PDGF-BB) na concentração de 300ng/ml na taxa de proliferação e adesão de células derivadas da granulação óssea humana a fragmentos radiculares periodontalmente comprometidos. Na primeira etapa do estudo, foi estabelecida cultura primária de células da granulação óssea de dois pacientes adultos, sistemicamente saudáveis, não fumantes. Após a expansão celular, as células foram caracterizadas para determinação do fenótipo por meio de ensaios de viabilidade celular, MTT, ensaio de atividade de fosfatase alcalina, ensaio de mineralização e caracterização imunohistoquímica por meio de citometria de fluxo (segunda etapa). Na terceira etapa do estudo, os efeitos da adição de PDGF-BB recombinante humano na concentração de 300ng/ml na taxa de proliferação e adesão de células derivadas da granulação óssea a superfícies radiculares periodontalmente comprometidas foram investigados. A taxa de proliferação celular estimulada pelo PDGF-BB (grupo teste) ou pelo meio de cultura (grupo controle) foi investigada por meio de contagem de células viáveis nos frascos de cultura após 1, 3, 5 e 7 dias do cultivo celular. Foram obtidos 30 fragmentos dentários a partir de dentes extraídos por razões periodontais. Os fragmentos foram raspados com curetas Gracey e condicionados com solução em gel de EDTA a 24% durante 3 minutos, lavados com solução de soro fisiológico, secos e posicionados em placas de 24 poços. Foram incubadas sobre os fragmentos tratados 1x104 células GO por 24 horas, seguido por fixação e preparo para análise por microscopia eletrônica de varredura (MEV). O número de células aderidas sobre os fragmentos foi analisado nas fotomicrografias. O padrão de crescimento das células GO foi compatível com células ósseas, com modificação do padrão do crescimento com o aumento do número de passagens. Houve atividade de fosfatase alcalina em meio osteogênico e convencional, com pico máximo aos 7 dias e atividade de mineralização estimulada ou não por meio osteogênico, com pico máximo aos 21 dias. A análise por meio de citometria de fluxo demonstrou que as células GO não expressaram CD105 e CD166 na 14a passagem, indicando sua diferenciação celular avançada nesse período. A adição de rhPDGF-BB resultou em mudança na taxa de proliferação celular, observando-se pico máximo de crescimento aos 7 dias, com diferenças estatisticamente significantes (p < 0.005; ANOVA post hoc Tukey) em relação aos períodos de 1, 3 e 5 dias. O ensaio de MTT demonstrou maior viabilidade celular no período de 48 hs, comparativamente aos períodos de 24 e 72 horas, quando a densidade óptica celular diminuiu de forma significativa (p< 0.05; Friedmann pósteste Dunn). No ensaio de adesão celular, pode-se observar que a adição de rhPDGFBB aumentou significativamente o número de células aderidas aos fragmentos dentários (p< 0.05; teste t não pareado com correção Welch), com alteração da morfologia celular. Esses resultados sugerem que as células GO tem características compatíveis com linhagem de células osteoblásticas, de fenótipo mais diferenciado após a 12a passagem. A adição de rhPDGF-BB (300ng/ml) resulta em aumento da taxa de proliferação das células GO e do número de células aderidas a fragmentos radiculares, indicando que, nesta concentração, o fator de crescimento é citocompatível, favorecendo a proliferação e adesão celular.(AU)

The goal of this study was to investigate the effects of recombinant human platelet derived growth factor (rhPDGF-BB) at the concentration of 300ng/ml in the proliferation and adhesion of human bone granulation cells to periodontally diseased root fragments. At the first stage of the study, the granulation tissue existent in healing sockets (21 days after its creation) was collected from two systemically healthy nonsmoking adults to the establishment of primary culture. The in vitro properties of bone granulation (BG) cell lineage were characterized by cell viability, MTT, alkaline phosphatase activity and mineralization assays. The effects of culture medium (control) and rhPGDF-BB 300ng/ml (test) in the proliferation and adhesion of BG cells were investigated. The rate of BG cells proliferation was investigated by the number of viable cells present at 1, 3, 5 and 7 days after platting. Thirty root fragments were obtained from teeth extracted for periodontal reasons. Root fragments were scaled and root planed, conditioned with EDTA 24% for 3 minutes, rinsed in saline solution, air-dryed and positioned in 24-well plates. Each fragment was seeded with 104 BG cells, fixated after 24 hours and prepared for analysis in SEM. The number of cells adhered to the fragments was analysed in photomicrographies. BG cells growth pattern was compatible with osteogenic cell lineage, showing modification with the increasing number of cell passage. GO cells expressed alkaline phosphatase activity in conventional and osteogenic culture medium, with maximum peak at 7 days, as well as mineralization activity stimulated or not by osteogenic or non-osteogenic culture medium, with maximum peak at 21 days. The analysis by flow cytometer showed that BG cells have not expressed CD105 and CD106 at the 14th passage, indicating its advanced cell differentiation. The addition of rhPDGF-BB resulted in modification of proliferation rate, with maximum peak observed at 7 days, significantly different from 1-, 3- and 5-day periods (p< 0.005; ANOVA post hoc Tukey). MTT assay showed greater cell viability after 48 hours than after 24 and 72 hours, when optical density has significantly diminished (p< 0.05; Friedmann post hoc Dunn). At cell adhesion assay, it could be observed that the adhesion of rhPDGF-BB has significantly increased the number of cells adhered to root fragments (p< 0.05; unpaired t test with Welchs correction), and alterations in cell morphology. These results suggest that BG cells present in vitro characteristics compatible with osteoblastic cell lineages, with a more differentiated phenotype after the 12th passage. The addition of rhPDGF-BB (300 ng/ml) results in increase of the rate of BG cell proliferation and in the number of cells adhered to root fragments, indicating that, at this concentration, the growth factor is compatible with BG cells and favors cells proliferation and adhesion.(AU)

Effect of autologous platelet-rich plasma application on cutaneous wound healing in dogs

This study was conducted to identify the effectiveness of platelet-rich plasma (PRP) and efficacy of intralesional injection as a method of application to acute cutaneous wounds in dogs. Healthy adult beagles (n = 3) were used in this study. Autologous PRP was separated from anticoagulant treated whole blood in three dogs. Cutaneous wounds were created and then treated by intralesional injection of PRP in the experimental group, while they were treated with saline in the control group on days 0, 2 and 4. The healing process was evaluated by gross examination throughout the experimental period and histologic examination on day 7, 14 and 21. In PRP treated wounds, the mean diameter was smaller and the wound closure rate was higher than in the control. Histological study revealed that PRP treated wounds showed more granulation formation and angiogenesis on day 7, and faster epithelialization, more granulation formation and collagen deposition were observed on day 14 than in control wounds. On day 21, collagen deposition and epithelialization were enhanced in PRP treated groups. Overall, PRP application showed beneficial effects in wound healing, and intralesional injection was useful for application of PRP and could be a good therapeutic option for wound management in dogs.

Comparison of different bronchial closure techniques following pneumonectomy in dogs

The comparison of the histologic healing and bronchopleural fistula (BPF) complications encountered with three different BS closure techniques (manual suture, stapler and manual suture plus tissue flab) after pneumonectomy in dogs was investigated for a one-month period. The dogs were separated into two groups: group I (GI) (n = 9) and group II (GII) (n = 9). Right and left pneumonectomies were performed on the animals in GI and GII, respectively. Each group was further divided into three subgroups according to BS closure technique: subgroup I (SGI) (n = 3), manual suture; subgroup II (SGII) (n = 3), stapler; and subgroup III (SGIII) (n = 3), manual suture plus tissue flab. The dogs were sacrificed after one month of observation, and the bronchial stumps were removed for histological examination. The complications observed during a one-month period following pneumonectomy in nine dogs (n = 9) were: BPF (n = 5), peri-operative cardiac arrest (n = 1), post-operative respiratory arrest (n = 1), post-operative cardiac failure (n = 1) and cardio-pulmonary failure (n = 1). Histological healing was classified as complete or incomplete healing. Histological healing and BPF complications in the subgroups were analyzed statistically. There was no significant difference in histological healing between SGI and SGIII (p = 1.00; p > 0.05), nor between SGII and SGIII (p = 1.00; p > 0.05). Similarly, no significant difference was observed between the subgroups in terms of BPF (p = 0.945; p > 0.05). The results of the statistical analysis indicated that manual suture, stapler or manual suture plus tissue flab could be alternative methods for BS closure following pneumonectomy in dogs.

Estudo dos componentes fibrocelulares das granulaçöes aracnóides humanas / Fibrocellular components study of human arachnoid granulations

O estudo microscópico dos elementos fibrocelulares da granulaçao aracnóide de seres humanos revela uma concentraçao de canalículos que cruzam a regiao medular, em direçao a luz do seio sagital superior. As células aracnóides acompanham a disposiçao espacial dos elementos fibrosos, através de seus processos citoplasmáticos alongados. Os feixes de fibras elásticas formam condensaçoes em torno dos espaços extracelulares e ao redor da granulaçao, isto, segundo os autores, forneceria grande maleabilidade a estrutura, capacitando-a a responder a diferentes estados funcionais, quer retraindo quer distendendo.

Fibrogênese e diferenciação celular: estudo histológico, ultra-estrutural e imuno-citoquímico com o modelo do bolsão inflamatório de Selye, em ratos / Fibrogenesis and cellular differentiation: histological, ultrastructural and immune citochemical study with Seyle´s

Este trabalho foi desenvolvido com o objetivo de se observar, sequencialmente, a fibrogênese e a diferenciação das células fusiformes da matriz conjuntiva durante a formação do tecido de granulação na parede de "bolsões inflamatórios", produzidos no dorso de ratos pela injeção, no tecido subcutâneo, de óleo d croon, seundo o model prpostopor SELYE (1953). Procederam-se estudos histológicos e ultraestruturais, além de imunomarcação, através da técnica de imunofluorescência indireta, dos colágenos dos tipos I, III, IV, da fibronectina e da laminina. Os resultados obtidos mostraram aspectos morfológicos intermediários entre pericitos, fibroblastos, miofibroblastos e células musculares lisas, sugerindo uma diferenciação progessiva das células da matriz a partir das células perivasculares. Nas fases inciais predominaram céulas com caacterísticas de fibroblastos e miofibroblastos com aparelho contrátil pouco desenvolvido, associados à deposicão de uma matriz frouxa, constituída, principalmente por fibronectina e colágeno do tipo III. Neste período ocorria degradação de colágeno no interior das células responsáveis por sua síntese, sugerindo um papel modulador destas células. Nas fases tardias, associada a uma matriz densa, organizada em feixes paralelos, constituída por colágenos dos tipos I e III, e fibronectina, predominaram células com caracetrísticas de miofibroblastos, contendo exuberante aparelho contrátil, e células musculares lisas, sem relacão com a parede de vasos. Nesta fase a matrix-celular mostrou focalmente, fragmentação, dissolução e depósitos granulosos grosseiros, que foram interpretados como evidências de degradação da matriz. A observação destes aspectos sugere que as células da matriz conjuntiva representam expressões...